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基質效應:來源、評價方法、避免

時間:2024-11-10   訪問量:625

基質效應(matrix effect)按NCCLS文件的定義,指(1)標(biao)本中除分(fen)(fen)析物(wu)(wu)以外(wai)的(de)其他成分(fen)(fen)對分(fen)(fen)析物(wu)(wu)測(ce)(ce)定值的(de)影(ying)響。(2)基質(zhi)對分(fen)(fen)析方(fang)法準確測(ce)(ce)定分(fen)(fen)析物(wu)(wu)的(de)能(neng)力的(de)干(gan)擾(rao)。廣義說來,基質(zhi)效應也應包(bao)括(kuo)已知的(de)干(gan)擾(rao)物(wu)(wu)(如Chol測(ce)(ce)定中膽紅素(su)、血(xue)(xue)紅蛋白、抗壞血(xue)(xue)酸等(deng)都是干(gan)擾(rao)物(wu)(wu)),但只將基質(zhi)效應限(xian)于生物(wu)(wu)材料中未知或(huo)未定性的(de)物(wu)(wu)質(zhi)或(huo)因(yin)素(su)(如粘度(du)、pH等(deng))的(de)影(ying)響。


化學分(fen)(fen)析中,基質指的(de)是樣品(pin)中被(bei)分(fen)(fen)析物(wu)以外的(de)組分(fen)(fen)。基質常常對(dui)分(fen)(fen)析物(wu)的(de)分(fen)(fen)析過(guo)程有顯著的(de)干擾,并影響分(fen)(fen)析結果的(de)準確性。例如,溶(rong)液的(de)離(li)子強度會對(dui)分(fen)(fen)析物(wu)活度系數有影響,這些影響和干擾被(bei)稱為基質效應(matrix effect)。

目前最(zui)常用的去除基質(zhi)效應(ying)的方法(fa)是(shi),通過已知分析(xi)物濃度的標(biao)準樣(yang)品(pin)(pin),同時盡可能保持樣(yang)品(pin)(pin)中基質(zhi)不變,建(jian)立(li)一個校正曲線。固體樣(yang)品(pin)(pin)同樣(yang)有很強(qiang)的基質(zhi)效應(ying),對其校正也尤為重要(yao)。


對于(yu)復(fu)雜(za)的(de)(de)(de)或者(zhe)未(wei)知組分基質的(de)(de)(de)影(ying)響(xiang),可(ke)以采用標(biao)準(zhun)添(tian)(tian)加(jia)(jia)法。在這一(yi)(yi)方法中,需(xu)要測(ce)量(liang)(liang)(liang)和記(ji)錄樣(yang)品的(de)(de)(de)響(xiang)應值(zhi)(zhi)。進一(yi)(yi)步加(jia)(jia)入少量(liang)(liang)(liang)的(de)(de)(de)標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye),再(zai)次記(ji)錄樣(yang)品的(de)(de)(de)響(xiang)應值(zhi)(zhi)。理(li)想(xiang)地說來,標(biao)準(zhun)添(tian)(tian)加(jia)(jia)應該增加(jia)(jia)分析(xi)物的(de)(de)(de)濃度1.5到(dao)3倍(bei),同時(shi)幾次添(tian)(tian)加(jia)(jia)的(de)(de)(de)溶(rong)液(ye)也應該保持一(yi)(yi)致。使用的(de)(de)(de)標(biao)準(zhun)樣(yang)品的(de)(de)(de)體(ti)積應該盡(jin)可(ke)能小,盡(jin)量(liang)(liang)(liang)降低過程中對基質的(de)(de)(de)影(ying)響(xiang)。


1.基質效應的來源

基(ji)質(zhi)效(xiao)應主(zhu)要來源(yuan)于生物(wu)(wu)(wu)樣品的(de)內源(yuan)性(xing)組分(fen),經前處(chu)理后仍(reng)存在于提取(qu)液(ye)中。包括離(li)子(zi)顆(ke)粒物(wu)(wu)(wu)成分(fen)(電(dian)解質(zhi)、鹽類)、強(qiang)極性(xing)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)(酚類、色素)和(he)各種有機(ji)(ji)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)(糖類、胺類、尿素、脂類、肽類及(ji)(ji)其(qi)分(fen)析目標(biao)物(wu)(wu)(wu)的(de)同(tong)類物(wu)(wu)(wu)及(ji)(ji)其(qi)代謝物(wu)(wu)(wu))。其(qi)中磷(lin)脂是最主(zhu)要的(de)內源(yuan)性(xing)組分(fen), 其(qi)對(dui)電(dian)噴霧電(dian)離(li)(ESI)和(he)大(da)氣壓化(hua)學電(dian)離(li) (APCI)均會產(chan)(chan)生離(li)子(zi)抑制作用。含有P=O、-O-CO-NH-、OH、R-NH-、-N=、-NH-CO-NH -等基(ji)團(tuan)的(de)農藥(yao)通(tong)常表(biao)現(xian)出較強(qiang)的(de)基(ji)質(zhi)效(xiao)應。由樣品處(chu)理過程(cheng)引入的(de)外源(yuan)性(xing)組分(fen),同(tong)樣會產(chan)(chan)生基(ji)質(zhi)效(xiao)應。主(zhu)要包括無機(ji)(ji)離(li)子(zi)、緩沖(chong)溶液(ye)、有機(ji)(ji)酸、離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑、增塑劑、表(biao)面(mian)活性(xing)劑殘留、固相萃取(qu)(SPE)小柱(zhu)材料及(ji)(ji)色譜柱(zhu)固定相流失物(wu)(wu)(wu)等。


2、基質效應評價方法

2.1較簡(jian)單(dan)的采用相(xiang)對響應(ying)值法

A:在純(chun)溶劑中農藥的響應值

B:樣品基質中添(tian)加的相同(tong)含(han)量農藥(yao)響應值

基質效應Matrix Effect (%)=B/A×100


2.1比較復雜的標準曲線測定法

配(pei)制(zhi)3組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)。第(di)(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)用有機溶劑配(pei)制(zhi)成(cheng)含系列濃度待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分和(he)內標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線(xian),可以做5個重(zhong)復。第(di)(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)是將5種不(bu)同(tong)(tong)(tong)來源或不(bu)同(tong)(tong)(tong)品種的(de)(de)(de)(de)的(de)(de)(de)(de)空白樣品經提(ti)取(qu)后(hou)加(jia)入與(yu)第(di)(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)相(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)(tong)(tong)系列濃度的(de)(de)(de)(de)待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分和(he)內標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)后(hou)制(zhi)得(de)。第(di)(di)(di)(di)3組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)采(cai)用與(yu)第(di)(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)相(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)(tong)(tong)的(de)(de)(de)(de)空白樣品在(zai)提(ti)取(qu)前加(jia)入與(yu)第(di)(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)相(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)(tong)(tong)系列濃度的(de)(de)(de)(de)待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分和(he)內標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)后(hou)再經提(ti)取(qu)后(hou)制(zhi)得(de)。通過比較3組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分的(de)(de)(de)(de)絕對(dui)(dui)響應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)、待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分與(yu)內標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)的(de)(de)(de)(de)響應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)比值(zhi)(zhi)和(he)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)的(de)(de)(de)(de)斜率,可以確定(ding)基質效(xiao)應(ying)(ying)對(dui)(dui)定(ding)量的(de)(de)(de)(de)影響。第(di)(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)測(ce)(ce)(ce)定(ding)結(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)(guo)可評價整個系統的(de)(de)(de)(de)重(zhong)復性。第(di)(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)測(ce)(ce)(ce)定(ding)結(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)(guo)同(tong)(tong)(tong)第(di)(di)(di)(di)1組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)測(ce)(ce)(ce)定(ding)結(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)(guo)相(xiang)(xiang)(xiang)比,若(ruo)待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分響應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)偏差明(ming)顯(xian)增(zeng)加(jia),表明(ming)存(cun)(cun)在(zai)基質效(xiao)應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)影響。對(dui)(dui)第(di)(di)(di)(di)3組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)測(ce)(ce)(ce)定(ding)結(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)(guo),若(ruo)待(dai)測(ce)(ce)(ce)組(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)(zu)分響應(ying)(ying)值(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)(xiang)對(dui)(dui)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)偏差明(ming)顯(xian)增(zeng)加(jia),表明(ming)存(cun)(cun)在(zai)基質效(xiao)應(ying)(ying)和(he)提(ti)取(qu)回收率因樣品來源不(bu)同(tong)(tong)(tong)而產生的(de)(de)(de)(de)共同(tong)(tong)(tong)影響。


3.基質效應的評估及如何避免基質效應的發生

基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效應(ying)所(suo)致分析結果的(de)(de)偏(pian)差(cha)稱(cheng)為(wei)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)偏(pian)差(cha)(matrix bias)。用作校準物質(zhi)(zhi)(zhi)或(huo)質(zhi)(zhi)(zhi)控物,經過處理(li)的(de)(de)混合(he)血清(qing)(qing),由于血清(qing)(qing)機制的(de)(de)理(li)化性(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)在處理(li)過程中的(de)(de)改(gai)變,在常規測定上往往出現基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)偏(pian)差(cha)。基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)偏(pian)差(cha)的(de)(de)出現也與(yu)分析系統(tong)(包(bao)括方(fang)法(fa)、試劑及(ji)所(suo)用儀器設備)有關,所(suo)以(yi)有人(ren)將(jiang)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效應(ying)定性(xing)為(wei)方(fang)法(fa)、材(cai)料(liao)與(yu)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)特異(yi)性(xing)反應(ying)。在基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效應(ying)的(de)(de)評估方(fang)法(fa)方(fang)面,通常認為(wei)測定新鮮(或(huo)冰凍)血清(qing)(qing)無(wu)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效應(ying),決定性(xing)方(fang)法(fa)或(huo)參考方(fang)法(fa)也無(wu)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)(zhi)效應(ying)。


參考訪(fang)法(fa)與常(chang)(chang)規(gui)方(fang)(fang)法(fa)測(ce)定同一批新鮮(xian)血(xue)清的結(jie)果一致,表(biao)示這(zhe)(zhe)項(xiang)常(chang)(chang)規(gui)方(fang)(fang)法(fa)沒有方(fang)(fang)法(fa)誤(wu)差(cha),如(ru)有差(cha)異(yi)則代表(biao)常(chang)(chang)規(gui)方(fang)(fang)法(fa)的“校準偏(pian)(pian)(pian)差(cha)”。用參考方(fang)(fang)法(fa)與常(chang)(chang)規(gui)方(fang)(fang)法(fa)測(ce)制備物(如(ru)室間質評樣(yang)品)時往往得(de)不一致結(jie)果,這(zhe)(zhe)種差(cha)異(yi)稱作調(diao)查(cha)(cha)偏(pian)(pian)(pian)差(cha)。調(diao)查(cha)(cha)偏(pian)(pian)(pian)差(cha)與校準偏(pian)(pian)(pian)差(cha)之差(cha)即基(ji)質偏(pian)(pian)(pian)差(cha)。


減(jian)少基質效應的主(zhu)要措施包括:

3.1、改進室間質評(ping)樣(yang)品,使其(qi)作用更像新(xin)鮮人(ren)血清(qing);

3.2、改進儀器設計及試劑組成;

3.3、選擇(ze)方法(fa)及方法(fa)學參數(shu),使(shi)其(qi)適(shi)應性更強,且容(rong)易(yi)掌握(wo),對制備物(wu)(校準物(wu)、室(shi)間質(zhi)評樣品與質(zhi)控物(wu))基(ji)質(zhi)的確切性質(zhi)不敏感。

 

天(tian)津健博(bo)生物科技有限公(gong)司,人布魯氏菌檢(jian)測,碳(tan)青霉烯酶(mei)檢(jian)測,體外診斷試劑

地(di)址(zhi):天津(jin)開發(fa)區第六大(da)街69號

電(dian)話(hua):022-65297906

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