講這個問題之前，首先問大家一個問題，為什(shen)么(me)微(wei)流控成(cheng)本這么(me)高，大家還不遺(yi)余力地去(qu)做探索(suo)？答案就在這個“控”字上。對于免疫層析，樣本爬樣有點太隨意了，完全處于一個不受控的狀態，爬樣狀態和結果就像擲骰子，即使我們把能做的功課都做足了，也難免有個別的樣本跟你調皮一下，非得不按套路出牌。雖然這個概率可能不到1%，但是從產品每年的出貨量考慮，比如出貨量是20萬人份/年，不合格條數就是2000條，這2000條不知道會招來多少個投訴。微流控分為被動微流控和主動微流控，被動微流控一般都是僅靠虹吸去爬樣，做到相對可控；主動微流控則會加上傳感器，根據壓力去控制流樣完全可控。當初這個概念剛出來的時候，我就覺得這確實是掀桌子的一個壯舉，但是奈何成本高出普通的膜墊層析太多，并不適合大眾普及。

       再講一個問題，問一下做過層析的同學，層析產品是定性好做，還是定量(liang)好做，或者(zhe)是半定量(liang)好做？前些天有人說，好做順序：定量產品＞定性＞半定量。從我個人而言，我沒法給出結論，只能說各有難點。定性產品哪里難？特異性！陰性樣本不允許出現一絲絲的條帶；半定量產品哪里難？不僅僅不讓出假陽，還得嚴格地卡住半定量的那幾個點的條帶深淺；定量產品哪里難？cv不好把控，跟發光產品比，可能就是個學渣級別的，但是陰性樣本允許存在一定的背景條帶，因為軟件可以扣除，講到這里，我大概明白那個朋友做這個排序的依據了，他肯定是做定性產品做多了??！

       上面我們說(shuo)到了，和微(wei)流控的(de)精裝修(xiu)相比，膜墊搭配的(de)層析(xi)(xi)就(jiu)像個毛坯(pi)房，樣(yang)品墊+結合墊+nc膜+吸水紙，永恒不變的(de)幾大版塊(kuai)。那么層析(xi)(xi)這(zhe)么大的(de)cv，到底能(neng)不能(neng)控一下呢(ni)？在哪里控呢(ni)？

1.結合墊(dian)用(yong)什么？

       和微(wei)球直接接觸的就是(shi)結合墊，它(ta)的類別直接影響了(le)微(wei)球的釋放狀態。它(ta)的種(zhong)類實在太多了(le)，目前最主流(liu)的就是(shi)玻(bo)纖和聚酯(zhi)，但是(shi)我(wo)們似(si)乎并不在乎它(ta)是(shi)什(shen)么材質，好用就行。從我(wo)個(ge)人的角度，我(wo)喜(xi)歡將它(ta)們分類成以下幾個(ge)方(fang)面：

A常(chang)見的(de)(de)(de)玻纖(xian)。像是(shi)奧斯(si)龍的(de)(de)(de)8964，表面(mian)上絲(si)絲(si)縷(lv)縷(lv)的(de)(de)(de)，親水(shui)性特(te)(te)(te)別(bie)(bie)好(hao)，蓄水(shui)量也(ye)特(te)(te)(te)別(bie)(bie)足(zu)，釋(shi)放速度快，殘(can)留少，是(shi)很(hen)多(duo)(duo)(duo)人非常(chang)喜歡的(de)(de)(de)一(yi)款玻纖(xian)。但是(shi)，我個(ge)人覺(jue)得(de)，對(dui)(dui)于(yu)很(hen)多(duo)(duo)(duo)新手，可能覺(jue)得(de)它(ta)并(bing)不好(hao)用，因為它(ta)對(dui)(dui)于(yu)CV方(fang)面(mian)的(de)(de)(de)把(ba)控并(bing)不是(shi)特(te)(te)(te)別(bie)(bie)好(hao)，因為材質表面(mian)的(de)(de)(de)絲(si)絲(si)縷(lv)縷(lv)，讓很(hen)多(duo)(duo)(duo)人做出(chu)(chu)來的(de)(de)(de)試紙(zhi)條(tiao)(tiao)Stream都非常(chang)嚴重，跑(pao)出(chu)(chu)來的(de)(de)(de)線(xian)條(tiao)(tiao)也(ye)是(shi)絲(si)絲(si)縷(lv)縷(lv)，深深淺淺，CV自然也(ye)就大了。

B常見的聚(ju)酯。聚(ju)酯的種(zhong)類非常多(duo)，有像(xiang)打印紙一(yi)樣致密的，也(ye)有像(xiang)奶(nai)酪的表面一(yi)樣坑(keng)坑(keng)洼洼的。它(ta)們的特點(dian)就是(shi)親水性普遍都很好(hao)，釋放很柔和也(ye)很徹(che)底，整體的cv把控要(yao)比(bi)常見的玻纖要(yao)好(hao)一(yi)些，雖然成本高一(yi)些，但更適合新手(shou)拿(na)來做定量產品。

C疏(shu)水性材質(zhi)。很(hen)(hen)多(duo)(duo)人做時間分(fen)辨也(ye)好，上(shang)轉(zhuan)發光也(ye)罷，微球的(de)釋(shi)放(fang)對(dui)(dui)他(ta)們來說總是(shi)個大問題。我用(yong)過很(hen)(hen)多(duo)(duo)公司的(de)產(chan)品，發現(xian)很(hen)(hen)多(duo)(duo)產(chan)品層析完(wan)了，結合(he)(he)墊還像(xiang)沒(mei)層析過一樣(yang)，殘(can)留的(de)不像(xiang)話。這種就(jiu)適合(he)(he)用(yong)偏疏(shu)水一些的(de)材質(zhi)，釋(shi)放(fang)速度很(hen)(hen)快，釋(shi)放(fang)殘(can)留非常低，唯一的(de)缺點就(jiu)是(shi)得(de)事先(xian)處(chu)理(li)才能用(yong)。通常情(qing)況，疏(shu)水的(de)墊子，cv把(ba)控(kong)中規中矩，噴金(jin)量偏大一些，相(xiang)對(dui)(dui)能把(ba)控(kong)的(de)很(hen)(hen)好。

D結合墊(dian)(dian)/樣品墊(dian)(dian)一(yi)體材質。目前(qian)國外的(de)(de)一(yi)些廠家(jia)生產出了pet材質的(de)(de)一(yi)體墊(dian)(dian)，既具備玻(bo)纖親水性極佳的(de)(de)特點(dian)，又具備聚(ju)酯釋(shi)放均勻柔和的(de)(de)特點(dian)，可以說是把優點(dian)集中到一(yi)起(qi)了吧，而且用一(yi)個(ge)墊(dian)(dian)子，比用兩個(ge)墊(dian)(dian)子引入的(de)(de)變異肯(ken)定更小。不過，它們材質普遍偏厚一(yi)些。

2.噴金(jin)or鋪(pu)金(jin)？烘(hong)干(gan)or凍干(gan)？

       這個方(fang)(fang)面大家(jia)應該一目(mu)了(le)然，從工(gong)序出(chu)現(xian)的(de)(de)時(shi)間先(xian)后就可(ke)以推斷哪種(zhong)更好(hao)。鋪金的(de)(de)出(chu)現(xian)都(dou)是(shi)(shi)(shi)(shi)之前(qian)做膠(jiao)體金定(ding)性(xing)產品的(de)(de)時(shi)候，那時(shi)候大部(bu)分廠家(jia)都(dou)還是(shi)(shi)(shi)(shi)采(cai)用(yong)無(wu)紡布的(de)(de)年(nian)代，如果(guo)采(cai)用(yong)鋪金的(de)(de)工(gong)藝來做定(ding)量產品，并不(bu)(bu)是(shi)(shi)(shi)(shi)說不(bu)(bu)行，只不(bu)(bu)過和噴(pen)金相比(bi)，確實CV更難把控，因為鋪金的(de)(de)均(jun)勻度和干(gan)(gan)(gan)燥過程中的(de)(de)動態(tai)變化是(shi)(shi)(shi)(shi)比(bi)較難以把控的(de)(de)。再(zai)說一下烘干(gan)(gan)(gan)和凍干(gan)(gan)(gan)，因為目(mu)前(qian)熒光顆粒(li)的(de)(de)粒(li)徑都(dou)在(zai)(zai)200nm以上，烘干(gan)(gan)(gan)其實很(hen)容(rong)易(yi)引發顆粒(li)的(de)(de)聚(ju)集或者嚴重的(de)(de)邊緣效應，凍干(gan)(gan)(gan)在(zai)(zai)保持(chi)蛋白活(huo)性(xing)和疏松程度方(fang)(fang)面都(dou)能很(hen)好(hao)把控，所以凍干(gan)(gan)(gan)毋庸(yong)置疑是(shi)(shi)(shi)(shi)優于烘干(gan)(gan)(gan)的(de)(de)。所以綜上來看，如果(guo)噴(pen)金配合凍干(gan)(gan)(gan)，理論上是(shi)(shi)(shi)(shi)最優的(de)(de)選擇。但是(shi)(shi)(shi)(shi)廠家(jia)還得考(kao)慮(lv)成(cheng)本問(wen)題，在(zai)(zai)很(hen)多方(fang)(fang)面不(bu)(bu)得不(bu)(bu)做出(chu)取(qu)舍。

3.您(nin)的產品堵膜了(le)嗎？

       微球的(de)(de)(de)標記我(wo)不(bu)(bu)想(xiang)再談了，我(wo)只說一(yi)下為什么有(you)時(shi)候(hou)(hou)同一(yi)批次的(de)(de)(de)條子測試相近濃度(du)的(de)(de)(de)不(bu)(bu)同樣(yang)本(ben)，很(hen)(hen)多時(shi)候(hou)(hou)T和C值差(cha)別非(fei)常大(da)？我(wo)有(you)時(shi)候(hou)(hou)會(hui)掰(bai)開卡殼觀察不(bu)(bu)同樣(yang)本(ben)的(de)(de)(de)測試狀(zhuang)態，發現微球都出現了不(bu)(bu)同程(cheng)度(du)的(de)(de)(de)堵(du)(du)膜(mo)，暫且不(bu)(bu)考(kao)慮不(bu)(bu)同樣(yang)本(ben)堵(du)(du)膜(mo)會(hui)有(you)差(cha)異的(de)(de)(de)問(wen)題，就說直接(jie)上(shang)樣(yang)本(ben)稀釋液就有(you)堵(du)(du)膜(mo)的(de)(de)(de)這種問(wen)題，能不(bu)(bu)能做出改善(shan)？對(dui)于層析產(chan)品，堵(du)(du)膜(mo)是(shi)一(yi)件非(fei)常糟糕(gao)的(de)(de)(de)事情，不(bu)(bu)僅CV不(bu)(bu)好，還會(hui)引入(ru)非(fei)常大(da)的(de)(de)(de)偏差(cha)，準確(que)度(du)都成了問(wen)題。所(suo)以我(wo)們(men)需要從各個(ge)方面考(kao)慮，如何讓我(wo)們(men)的(de)(de)(de)微球分散性更好，聚合形式比例更少。比如之前美牛生物提到的(de)(de)(de)，讓標記緩(huan)沖鹽離子濃度(du)降(jiang)到很(hen)(hen)低等(deng)。

4.阻斷劑影響到T和C了嗎？

       目前(qian)為了防(fang)止(zhi)類風濕因子或(huo)者異嗜性抗(kang)體的(de)(de)(de)(de)干擾(rao)(rao)，阻(zu)(zu)(zu)斷劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)使用變得(de)非(fei)常普遍，一(yi)般都是(shi)加在樣(yang)(yang)品墊處理液(ye)里面。首(shou)先考慮(lv)這(zhe)(zhe)個阻(zu)(zu)(zu)斷劑(ji)(ji)是(shi)不是(shi)鼠源的(de)(de)(de)(de)，而你(ni)的(de)(de)(de)(de)C線(xian)(xian)用的(de)(de)(de)(de)是(shi)不是(shi)羊抗(kang)鼠，這(zhe)(zhe)樣(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)話本(ben)(ben)身體系(xi)就存在問題，導(dao)(dao)致(zhi)(zhi)C線(xian)(xian)很弱；如果樣(yang)(yang)品墊處理的(de)(de)(de)(de)過程本(ben)(ben)身就不均勻(yun)，那么C線(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)高低起伏就顯得(de)很正常；同(tong)樣(yang)(yang)地(di)，有(you)時候(hou)阻(zu)(zu)(zu)斷劑(ji)(ji)對于(yu)T線(xian)(xian)也就是(shi)特異性反應也會有(you)干擾(rao)(rao)，不同(tong)的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)本(ben)(ben)干擾(rao)(rao)程度還不一(yi)樣(yang)(yang)，這(zhe)(zhe)又(you)導(dao)(dao)致(zhi)(zhi)了T線(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)不穩定。所以(yi)從這(zhe)(zhe)方面考慮(lv)，阻(zu)(zu)(zu)斷劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)種類篩(shai)選和使用方法就成(cheng)了很有(you)必要的(de)(de)(de)(de)一(yi)項工(gong)作。

5.樣本直接(jie)上(shang)樣？

       靈(ling)敏(min)度不(bu)(bu)(bu)夠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)時候，迫不(bu)(bu)(bu)得已采用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)下策。我(wo)們知道，血(xue)清樣(yang)本什么(me)狀態的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)都有(you)(you)，有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)像(xiang)清水，有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)像(xiang)豆油，還(huan)(huan)有(you)(you)溶血(xue)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)像(xiang)茶(cha)色的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)花(hua)生油。直接(jie)上樣(yang)，有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)爬(pa)(pa)速正(zheng)常(chang)，有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)根(gen)本爬(pa)(pa)不(bu)(bu)(bu)動，CV偏大也(ye)就(jiu)是家常(chang)便飯了。還(huan)(huan)有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)廠(chang)家測(ce)試(shi)(shi)(shi)(shi)指(zhi)(zhi)尖血(xue)，暫且不(bu)(bu)(bu)提紅(hong)細胞壓(ya)積(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)差(cha)異(yi)，我(wo)感(gan)覺做指(zhi)(zhi)尖血(xue)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)定性(xing)對我(wo)來說就(jiu)挺難的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)，做定量？我(wo)都不(bu)(bu)(bu)想談CV這個詞了。不(bu)(bu)(bu)過，不(bu)(bu)(bu)管測(ce)全血(xue)還(huan)(huan)是血(xue)清，直接(jie)上樣(yang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)話，濾(lv)血(xue)膜的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)使用都是必(bi)不(bu)(bu)(bu)可少(shao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)，它還(huan)(huan)多少(shao)能給試(shi)(shi)(shi)(shi)劑帶(dai)來一些正(zheng)向(xiang)作用。那么(me)，如(ru)果測(ce)試(shi)(shi)(shi)(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是血(xue)漿，不(bu)(bu)(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗凝劑帶(dai)來的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)干擾，會不(bu)(bu)(bu)會引發大的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)變異(yi)，也(ye)得需要(yao)做嚴格(ge)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)驗證(zheng)。如(ru)果沒做驗證(zheng)，那就(jiu)盡量測(ce)試(shi)(shi)(shi)(shi)血(xue)清，別整花(hua)活忽悠人。

6.您的(de)卡殼設計(ji)的(de)合理嗎？

       ;卡(ka)殼？很多(duo)人并不在意，其實這是(shi)個(ge)加(jia)(jia)分項。加(jia)(jia)樣孔的位(wei)置，結合(he)墊處的那兩個(ge)橫梁(liang)的高低，是(shi)我最為在意的地(di)方。加(jia)(jia)樣孔位(wei)置偏上，會引發(fa)持續或二次層析(xi)；橫梁(liang)位(wei)置靠上，卡(ka)殼便失去了意義。恰到(dao)好處的設計，能很大程度地(di)控制層析(xi)，降低變異。

       這里順(shun)便提一(yi)下吸水紙的(de)(de)問題。有的(de)(de)吸水紙蓄水量大，但親(qin)(qin)水性差；有的(de)(de)則是親(qin)(qin)水性強，蓄水量低。選擇(ze)一(yi)款合適(shi)的(de)(de)吸水紙，或者選取2款搭配(pei)使用，也是一(yi)個(ge)加分項。

7.膠體金定量or熒光微球定量？

       從之前的研發經驗和儀器對比來看，目前具體用哪種載體來定量已經變得沒那么重要了。膠體金的儀器目前響應已足夠靈敏，CV也并不輸于熒光儀器。如果從顆粒的大小來考慮，膠體金(20-40nm)在靈敏度方面確實比熒光微球(200-400nm)低一些。但是(shi)(shi)，有(you)意思的是(shi)(shi)，對于(yu)上述提到(dao)的直接(jie)上樣(yang)(yang)的樣(yang)(yang)本，通常膠體金(jin)跑出來的CV，反而是(shi)(shi)優于(yu)熒光(guang)微球的，它表現出的抗干擾能力更為(wei)出色，不(bu)知道(dao)是(shi)(shi)不(bu)是(shi)(shi)僅僅是(shi)(shi)出于(yu)顆粒(li)大(da)小的影(ying)響。

文章來源(yuan)于(yu)IVDdiagnosis，作者IVDdiagnosis