按(an)《體外診(zhen)斷試劑(ji)分(fen)析性能(neng)評估指導原(yuan)則》，主(zhu)要的分(fen)析性能(neng)評估項目有：檢測限、線性范(fan)圍(wei)、可報告范(fan)圍(wei)、準確(que)度(du)（回收實驗(yan)(yan)）、準確(que)度(du)（方法(fa)學比對）、精密(mi)度(du)、干擾(rao)實驗(yan)(yan)、穩定(ding)性、參(can)考值(zhi)。目前國際上通(tong)常是以(yi)美國臨床實驗(yan)(yan)室(shi)標準化(hua)組織(zhi)（CLSI）的(de)相關標(biao)準為依據。

產(chan)品(pin)性能(neng)評(ping)估是產(chan)品(pin)研發(fa)、制定(ding)產(chan)品(pin)標準等過程的重要技(ji)術支(zhi)持(chi)研究過程，并(bing)可(ke)能(neng)對產(chan)品(pin)質量(liang)造成(cheng)一(yi)定(ding)影響。在整個(ge)研發(fa)過程中，涉及原料(liao)、工藝和(he)思路(lu)，因為行業(ye)處于黃金(jin)發(fa)展階(jie)段，很少去(qu)關注和(he)優化整個(ge)研發(fa)流程，如果沒理順這三(san)者關系，整個(ge)研發(fa)流程會(hui)陷入盲目與不可(ke)持(chi)續。

剛接觸研(yan)發時，一般是以(yi)現有體(ti)系，包(bao)含穩定的配方體(ti)系（包(bao)被緩沖液(ye)(ye)(ye)、封閉緩沖液(ye)(ye)(ye)、酶標緩沖液(ye)(ye)(ye)、校準品稀釋液(ye)(ye)(ye)、發光底(di)物液(ye)(ye)(ye)）和工藝(yi)流程(cheng)，一切就著(zhu)(zhu)拿來主義(yi)，用已(yi)有的配方，就著(zhu)(zhu)已(yi)有的工藝(yi)，按著(zhu)(zhu)流程(cheng)操作，多數(shu)工作用于篩選配對，分析(xi)數(shu)據。

這(zhe)個入(ru)門階段(duan)，一般(ban)至少維持2-3年，因為配(pei)(pei)方體(ti)系和工藝(yi)體(ti)系（以(yi)下簡稱(cheng)工藝(yi)，包含配(pei)(pei)方和體(ti)系）是前人通過(guo)大量(liang)(liang)研(yan)究成果(guo)而建立的(de)，一般(ban)比較(jiao)(jiao)(jiao)穩定，較(jiao)(jiao)(jiao)少修(xiu)改（就(jiu)算要改進，權限也是在研(yan)發(fa)總監手中），加(jia)上整(zheng)個研(yan)發(fa)思路已經(jing)流程化，不用(yong)思考(kao)太多。很(hen)多新技術員，通過(guo)這(zhe)種(zhong)配(pei)(pei)對篩(shai)(shai)選后(hou)，會從一定數量(liang)(liang)的(de)配(pei)(pei)對中篩(shai)(shai)選出(chu)比較(jiao)(jiao)(jiao)合適的(de)配(pei)(pei)對，進行下一環節研(yan)發(fa)，很(hen)容易就(jiu)得出(chu)，一個試劑盒好壞，基本取決于(yu)原料質量(liang)(liang)，如(ru)果(guo)沒有篩(shai)(shai)選到好原料，或者碰(peng)到難(nan)項目，就(jiu)無(wu)從入(ru)手。

我們將原料、工(gong)藝和思路(lu)，細細拆解(jie)來分析，目(mu)的(de)(de)(de)是(shi)理清性(xing)能(neng)評(ping)估項目(mu)中，哪些項目(mu)是(shi)原料決(jue)定的(de)(de)(de)，哪些項目(mu)是(shi)工(gong)藝決(jue)定的(de)(de)(de)，哪些項目(mu)是(shi)兩者共同影響的(de)(de)(de)，促進研發思路(lu)的(de)(de)(de)形(xing)成與成熟，希望能(neng)夠拋(pao)磚引玉。

一．原料

我(wo)們將免疫試劑中(zhong)關(guan)鍵(jian)原(yuan)料提煉出來(lai)，分(fen)為兩(liang)塊：抗原抗體和(he)特殊成分。

1、抗原抗體 

免(mian)(mian)疫(yi)試劑一般(ban)可以分為兩(liang)個過程(cheng)：免(mian)(mian)疫(yi)反(fan)應(ying)(ying)和顯色反(fan)應(ying)(ying)。免(mian)(mian)疫(yi)反(fan)應(ying)(ying)是(shi)核心，將待測物特異(yi)性地從復雜樣本中分離出來(lai)，這一環節的(de)好壞，直(zhi)接決(jue)定(ding)整個試劑的(de)核心質量。

在工業(ye)生產(chan)上，免(mian)疫檢測用的抗體，一般是通(tong)過工程菌表(biao)達抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)片段(duan)，免(mian)疫動(dong)物(wu)，進行(xing)多(duo)克隆或者單(dan)克隆抗(kang)(kang)(kang)體制備(bei)，然后(hou)得到的抗(kang)(kang)(kang)體，進行(xing)配對(dui)(dui)篩選(xuan)，選(xuan)出合(he)適的配對(dui)(dui)應(ying)用(yong)(yong)于(yu)(yu)免(mian)疫檢測。在這個過程中，由于(yu)(yu)待測抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)一般(ban)都是(shi)天然抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)（少數(shu)科研檢測重組(zu)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)），而制備(bei)和(he)篩選(xuan)抗(kang)(kang)(kang)體一般(ban)又是(shi)使用(yong)(yong)重組(zu)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)，因此會帶來很多(duo)應(ying)用(yong)(yong)問題，這個對(dui)(dui)抗(kang)(kang)(kang)體制備(bei)商來說(shuo)，值得重視。

2、特殊成分(fen) 

免疫(yi)反應(ying)做為(wei)一個(ge)脆(cui)弱(ruo)的非共價鍵結合過程，整(zheng)個反應(ying)受時間、干(gan)擾物、橋聯物、結構(gou)類似物等(deng)影響，為消除這些不良影響，一般在緩沖體(ti)系中(zhong)會增加一些特(te)殊成分(fen)，這些特(te)殊成分(fen)我們定義為次要(yao)原料(liao)，在工藝(yi)中(zhong)詳述。

二．工藝

工藝包含配方(fang)(fang)體系和工藝流程，兩者(zhe)相(xiang)輔相(xiang)成。所有的(de)配方(fang)(fang)和工藝，是為保障和提(ti)高(gao)產品(pin)(pin)性(xing)能而設計的(de)，當原料無法滿足產品(pin)(pin)性(xing)能要求時，如(ru)何通過(guo)配方(fang)(fang)工藝來提(ti)高(gao)，或者(zhe)說，哪些(xie)性(xing)能能通過(guo)配方(fang)(fang)工藝來提(ti)高(gao)，如(ru)何來提(ti)高(gao)，哪些(xie)只能由原料決定，這個在我們(men)研發(fa)職業(ye)生(sheng)涯中，要不斷積累與(yu)完善。

1、配方體系 

配方體(ti)系可以拆解為緩沖體(ti)系和(he)改(gai)進體(ti)系。

（1）緩(huan)(huan)沖體系 一般的(de)緩(huan)(huan)沖體系，在教科書、產(chan)品說明書、論文(wen)中均可(ke)見到，主要包含離子(zi)對類型、離子(zi)濃度、pH值等內(nei)容，非保密配方，比較(jiao)容易理解(jie)與掌(zhang)握。

（2）改進(jin)體(ti)(ti)系 因為免疫反應的(de)(de)非(fei)共(gong)價鍵結合(he)的(de)(de)脆弱性，依靠一個簡單(dan)緩沖體(ti)(ti)系，要獲得很好(hao)的(de)(de)反應結果(guo)，是比較困難的(de)(de)，針對這種(zhong)問題，科學家設計了各種(zhong)改進(jin)體(ti)(ti)系，這些體(ti)(ti)系下面，又有(you)各種(zhong)方法產生。

A、降低(di)本底體系(xi)

a、使用合適的包被、標記濃度，一般(ban)采用棋盤滴(di)定確定。

b、加入(ru)增加溶(rong)解率，降低(di)非(fei)特異吸附的物質，如曲(qu)通、吐溫。

B、減少干擾體系

a、加入(ru)正常(chang)鼠(shu)(shu)血清或者鼠(shu)(shu)IgG，降低人抗鼠(shu)(shu)抗體(ti)影響

b、加入阻斷(duan)劑，降低類風濕因子干擾

C、減(jian)少前帶效應體系

a、適(shi)當提高(gao)包被和標記濃度，兼顧本底

b、加入檢(jian)測(ce)抗體(ti)裸抗，兼顧靈(ling)敏度

D、增加靈敏度體(ti)系(xi)

a、加入(ru)曲通、吐(tu)溫等

b、加入(ru)特殊(shu)物(wu)質，如S19

E、提高檢出率體系

a、多個抗(kang)體聯合使用(yong)，如CnTI項目

F、提高(gao)穩定性體系(xi)

a、緩沖液加入保(bao)護性蛋白、糖(tang)類、小(xiao)分子化合(he)物

G、等等其他體系 隨著研究(jiu)深入，這個目錄(lu)會不斷增加，相應的方法也會不斷增多。

2、工藝流程 

工藝(yi)流(liu)程(cheng)(cheng)(cheng)，又包(bao)含生產(chan)工藝(yi)流(liu)程(cheng)(cheng)(cheng)和試劑盒檢測操作工藝(yi)流(liu)程(cheng)(cheng)(cheng)兩個方(fang)面。

（1）生(sheng)產工藝(yi)(yi)流(liu)程 生(sheng)產工藝(yi)(yi)流(liu)程，對(dui)(dui)整(zheng)個(ge)的(de)產品(pin)性能，有非常大的(de)影響，比如(ru)預(yu)包被板制(zhi)備工藝(yi)(yi)，包被、封閉、干燥的(de)溫(wen)度、時間，對(dui)(dui)整(zheng)個(ge)性能影響很大，需要(yao)研發摸索。

（2）檢(jian)測操(cao)作(zuo)工(gong)藝(yi)流(liu)程 相比(bi)生產工(gong)藝(yi)，試劑盒(he)的(de)檢(jian)測操(cao)作(zuo)工(gong)藝(yi)，對性能影響更大，一步(bu)法、兩步(bu)法，加(jia)樣量，加(jia)樣順序，溫育溫度，溫育時(shi)間。

三．思路

我們分(fen)析原料與工藝，就是為(wei)了找到一個合適的研發(fa)思(si)路(lu)，指導研發(fa)過程，提高研發(fa)效率，整個研發(fa)思(si)路(lu)，我們再(zai)劃(hua)分(fen)為(wei)產(chan)品研發(fa)和改進(jin)研發(fa)兩個問(wen)題。

1、產品研發 

產(chan)品(pin)研(yan)(yan)(yan)發是(shi)一個從無到有(you)(you)的(de)(de)過(guo)程(cheng)，多數(shu)是(shi)根據(ju)市面上已(yi)有(you)(you)的(de)(de)試(shi)劑，研(yan)(yan)(yan)發自己(ji)公(gong)司沒(mei)有(you)(you)的(de)(de)產(chan)品(pin)。這個過(guo)程(cheng)占研(yan)(yan)(yan)發的(de)(de)大(da)頭，我們再將其細分為初步研(yan)(yan)(yan)發、預(yu)臨床(chuang)實驗和穩定(ding)性(xing)測試(shi)三個過(guo)程(cheng)。所有(you)(you)的(de)(de)研(yan)(yan)(yan)發，我們都必須知道，一個性(xing)能項目，他是(shi)怎么評(ping)估的(de)(de)，哪(na)些因素會影(ying)響這個性(xing)能，如何改進，我們以雙抗體夾心(xin)為例列舉。

（1）初(chu)步研發 初(chu)步研發時，一般重點強調三(san)個(ge)活(huo)性(xing)成(cheng)分：包被抗(kang)(kang)(kang)體、檢(jian)測抗(kang)(kang)(kang)體、校準品(pin)。包被抗(kang)(kang)(kang)體和(he)檢(jian)測抗(kang)(kang)(kang)體，會有(you)一個(ge)經(jing)驗濃度(du)，校準品(pin)一般用合適基質，將(jiang)抗(kang)(kang)(kang)原或者高值(zhi)樣本進行(xing)梯度(du)稀(xi)釋，獲(huo)取的(de)梯度(du)濃度(du)進行(xing)第(di)三(san)方(fang)賦值(zhi)，追溯到國際、國家(jia)或者企業(ye)標準品(pin)。

初(chu)步研(yan)發多數是在做配(pei)對(dui)(dui)篩選(xuan)，只需要用(yong)(yong)檢測限、線性范圍(wei)、可報(bao)告范圍(wei)這(zhe)三(san)個(ge)性能評估項目，即可篩選(xuan)出候選(xuan)配(pei)對(dui)(dui)。比(bi)如(ru)拿到10株抗體，可以做成100個(ge)配(pei)對(dui)(dui)，進行篩選(xuan)，選(xuan)出初(chu)步可用(yong)(yong)的候選(xuan)配(pei)對(dui)(dui)若(ruo)干(gan)對(dui)(dui)。

對(dui)初篩的候(hou)選配(pei)對(dui)，進行(xing)精(jing)密(mi)度、準確度（回收實驗(yan)）、干擾實驗(yan)評(ping)估(gu)，通過(guo)這(zhe)些實驗(yan)，再二次篩選候(hou)選配(pei)對(dui)。

（2）預臨(lin)床實驗(yan)(yan) 不(bu)涉(she)及(ji)臨(lin)床血(xue)清(qing)樣本的(de)初步研發都完成后(hou)，獲得一定的(de)候選配對(dui)，進行預臨(lin)床實驗(yan)(yan)，主要是評(ping)估(gu)準確度（方法學比較）和參考值區間。

（3）穩(wen)定性(xing)(xing)測試 通過上面兩個步驟，試劑盒初(chu)步成型，活(huo)性(xing)(xing)組分（包含(han)預包被板(ban)、校準品、酶標抗體）的穩(wen)定性(xing)(xing)，需要一一評(ping)價與改進(jin)，直到滿足(zu)要求(qiu)。

2、改進研發

整(zheng)個試(shi)劑盒的(de)(de)研(yan)(yan)發(fa)，最終就是(shi)為了檢測臨(lin)(lin)床(chuang)血清樣本，所有的(de)(de)分析性能評估項目(mu)，也是(shi)為這個目(mu)的(de)(de)而設計，但是(shi)在(zai)整(zheng)個研(yan)(yan)發(fa)過程(cheng)中，不(bu)管是(shi)預臨(lin)(lin)床(chuang)試(shi)驗，還是(shi)正式(shi)臨(lin)(lin)床(chuang)試(shi)驗，配(pei)對測試(shi)的(de)(de)臨(lin)(lin)床(chuang)血清樣本量，是(shi)非常(chang)有限的(de)(de)，頂多(duo)就算是(shi)完(wan)成一個小試(shi)生產。到真正產品上市(shi)和(he)臨(lin)(lin)床(chuang)應用時，隨著樣本量的(de)(de)擴大，很多(duo)之前沒有暴露的(de)(de)問題(ti)，都(dou)會集中暴露，必須收集足(zu)夠數據，進行改進研(yan)(yan)發(fa)。

一般(ban)這(zhe)個階段，就(jiu)是(shi)針對(dui)臨床不(bu)符合的樣(yang)本(ben)(ben)，特別是(shi)假(jia)(jia)陽(yang)性(xing)、假(jia)(jia)陰性(xing)樣(yang)本(ben)(ben)，要(yao)(yao)對(dui)樣(yang)本(ben)(ben)進行(xing)不(bu)同廠(chang)家試劑檢(jian)測(ce)比對(dui)，成(cheng)分分析(xi)等(deng)等(deng)，這(zhe)個過程在預臨床和(he)正式臨床都會(hui)做，在預臨床和(he)正式臨床時，還要(yao)(yao)對(dui)檢(jian)測(ce)值嚴(yan)重(zhong)不(bu)符，但并未導(dao)致假(jia)(jia)陽(yang)、假(jia)(jia)陰性(xing)的樣(yang)本(ben)(ben)，進行(xing)分析(xi)。