我們都知道，剛接觸研發時，一般是以現有體系，包含穩定的配方體系（包被緩沖液、封閉緩沖液、酶標緩沖液、校準品稀釋液、發光底物液）和工藝流程，一切就著拿來主義，用已有的配方，就著已有的工藝，按著流程操作，多數工作用于篩選配對，分析數據。但是誰也不會系統的教你去學習，都是拿著自己的經驗在吃飯，沒有系統的學習，沒有一定的研發思維，是很難快速自己做出產成品，這時候就要記得如入我們知識星球（文章結尾掃碼加入）。

在體外診斷試劑(ji)產品研(yan)發過程中(zhong)，我(wo)們(men)需要性能評估，原料占70%，工(gong)藝占20%，思路占10%。按《體(ti)外(wai)診(zhen)斷試(shi)劑分析(xi)性(xing)能(neng)評估指導(dao)原則》，主要(yao)的(de)分析(xi)性(xing)能(neng)評估項(xiang)目(mu)有：檢測限、線性(xing)范圍(wei)、可報告(gao)范圍(wei)、準確度（回收實驗(yan)）、準確度（方法學比對）、精密(mi)度、干擾實驗(yan)、穩定性(xing)、參考值。目(mu)前國際上通常是以美國臨床實驗(yan)室(shi)標準化組織（CLSI）的(de)相關標(biao)準(zhun)為依據(ju)。

產(chan)(chan)(chan)品性(xing)能(neng)評估(gu)是產(chan)(chan)(chan)品研(yan)發、制定(ding)產(chan)(chan)(chan)品標準等(deng)過(guo)程(cheng)的(de)重要技術支持研(yan)究過(guo)程(cheng)，并(bing)可能(neng)對產(chan)(chan)(chan)品質(zhi)量造成一(yi)定(ding)影響。在整(zheng)(zheng)個(ge)(ge)研(yan)發過(guo)程(cheng)中，涉及原料、工藝和思路，因為行(xing)業(ye)處于(yu)黃金發展階(jie)段，很少去關注和優化整(zheng)(zheng)個(ge)(ge)研(yan)發流(liu)程(cheng)，如果(guo)沒理順(shun)這三者(zhe)關系，整(zheng)(zheng)個(ge)(ge)研(yan)發流(liu)程(cheng)會陷入(ru)盲(mang)目與(yu)不(bu)可持續。

這個(ge)入(ru)門(men)階段(duan)，一(yi)般(ban)(ban)至少(shao)維持2-3年，因為配(pei)(pei)方(fang)體系(xi)和(he)工藝體系(xi)（以下(xia)簡稱工藝，包含(han)配(pei)(pei)方(fang)和(he)體系(xi)）是(shi)前人通過大(da)量研(yan)(yan)究成果而建(jian)立的，一(yi)般(ban)(ban)比(bi)較穩定，較少(shao)修改（就(jiu)算要(yao)改進，權限也是(shi)在研(yan)(yan)發總監手中(zhong)），加上整個(ge)研(yan)(yan)發思(si)路已經流程化，不(bu)用思(si)考太多。很多新技術員，通過這種配(pei)(pei)對(dui)篩(shai)選(xuan)后，會從(cong)一(yi)定數量的配(pei)(pei)對(dui)中(zhong)篩(shai)選(xuan)出(chu)比(bi)較合(he)適的配(pei)(pei)對(dui)，進行下(xia)一(yi)環節研(yan)(yan)發，很容易就(jiu)得(de)出(chu)，一(yi)個(ge)試劑盒好(hao)(hao)壞，基(ji)本取決(jue)于原料(liao)質(zhi)量，如果沒(mei)有篩(shai)選(xuan)到好(hao)(hao)原料(liao)，或者碰到難項目，就(jiu)無從(cong)入(ru)手。

我們將(jiang)原料、工藝和思路，細細拆解來分(fen)析，目的(de)(de)是(shi)(shi)理清性能(neng)(neng)評估項(xiang)目中(zhong)，哪(na)(na)些項(xiang)目是(shi)(shi)原料決定(ding)的(de)(de)，哪(na)(na)些項(xiang)目是(shi)(shi)工藝決定(ding)的(de)(de)，哪(na)(na)些項(xiang)目是(shi)(shi)兩者共同(tong)影(ying)響的(de)(de)，促進研(yan)發(fa)思路的(de)(de)形成與(yu)成熟，希望能(neng)(neng)夠(gou)拋(pao)磚引玉。

一．原料

我們將(jiang)免疫試劑中(zhong)關(guan)鍵原料提煉出(chu)來(lai)，分為兩(liang)塊(kuai)：抗原抗體和特殊成分。

1、抗原抗體 

免疫(yi)試(shi)劑一般可以分為兩個過(guo)程(cheng)：免疫(yi)反(fan)應和顯(xian)色反(fan)應。免疫(yi)反(fan)應是核(he)心(xin)，將(jiang)待(dai)測物特異性地(di)從復雜樣本中(zhong)分離出來，這一環節的好壞，直接(jie)決定整個試(shi)劑的核(he)心(xin)質量。

在工業生產上，免疫檢測用的(de)抗體，一般是通過工程菌表達抗(kang)(kang)(kang)原片段，免疫動(dong)物(wu)，進行(xing)多克隆或者單克隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)制備，然后(hou)得到(dao)的抗(kang)(kang)(kang)體(ti)，進行(xing)配對(dui)(dui)篩選(xuan)，選(xuan)出合適(shi)的配對(dui)(dui)應(ying)用于免疫檢(jian)測。在這(zhe)個(ge)過(guo)程中，由(you)于待測抗(kang)(kang)(kang)原一般(ban)都是天然抗(kang)(kang)(kang)原（少數科研檢(jian)測重組抗(kang)(kang)(kang)原），而制備和篩選(xuan)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)一般(ban)又是使用重組抗(kang)(kang)(kang)原，因此會帶來很多應(ying)用問題(ti)，這(zhe)個(ge)對(dui)(dui)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)制備商來說，值得重視(shi)。

2、特殊成分 

免(mian)疫反應(ying)做為一(yi)個脆(cui)弱的非共價鍵結合過程，整個反(fan)應受時間、干擾物、橋聯物、結(jie)構(gou)類似物等(deng)影響(xiang)，為(wei)消(xiao)除(chu)這些(xie)不良影響(xiang)，一般在緩沖體系(xi)中(zhong)會增加一些(xie)特殊成分，這些(xie)特殊成分我們定義為(wei)次要原料，在工藝中(zhong)詳述(shu)。

二．工藝

工(gong)藝(yi)包含配(pei)(pei)方體系(xi)和工(gong)藝(yi)流程，兩(liang)者相輔相成。所有的配(pei)(pei)方和工(gong)藝(yi)，是為保障和提(ti)高(gao)(gao)產(chan)品(pin)性能而設計的，當(dang)原料無(wu)法滿足(zu)產(chan)品(pin)性能要(yao)求時(shi)，如何(he)通過配(pei)(pei)方工(gong)藝(yi)來提(ti)高(gao)(gao)，或(huo)者說，哪些性能能通過配(pei)(pei)方工(gong)藝(yi)來提(ti)高(gao)(gao)，如何(he)來提(ti)高(gao)(gao)，哪些只能由(you)原料決定，這(zhe)個在我(wo)們(men)研發職業生涯(ya)中，要(yao)不斷(duan)積累與完善。

1、配方體系 

配方(fang)體(ti)系(xi)可以拆解為(wei)緩沖體(ti)系(xi)和改進體(ti)系(xi)。

（1）緩(huan)沖體系 一(yi)般的緩(huan)沖體系，在教科書(shu)、產品說明書(shu)、論文(wen)中均可見(jian)到，主要包含離子(zi)對(dui)類型、離子(zi)濃度、pH值(zhi)等內容(rong)，非保密配方(fang)，比較容(rong)易理解與掌(zhang)握。

（2）改(gai)進(jin)體(ti)(ti)系(xi) 因為免疫反應(ying)的(de)非共價鍵(jian)結合(he)的(de)脆弱性，依靠一個簡(jian)單緩沖體(ti)(ti)系(xi)，要(yao)獲得很好(hao)的(de)反應(ying)結果，是比較困難(nan)的(de)，針對這(zhe)(zhe)種問題，科學(xue)家(jia)設計了各種改(gai)進(jin)體(ti)(ti)系(xi)，這(zhe)(zhe)些(xie)體(ti)(ti)系(xi)下面，又有(you)各種方法產(chan)生。

A、降低(di)本底體系(xi)

a、使用(yong)合適的包被、標記濃(nong)度，一般采(cai)用(yong)棋盤滴定確定。

b、加入增加溶(rong)解率，降低非特異吸附的物質，如曲通(tong)、吐溫。

B、減少干(gan)擾體系

a、加入正常鼠血清或者鼠IgG，降低人抗鼠抗體(ti)影(ying)響

b、加入阻(zu)斷劑(ji)，降低類風濕因子干擾

C、減少(shao)前帶效(xiao)應體系(xi)

a、適當提高(gao)包被(bei)和標記濃度，兼顧本底(di)

b、加(jia)入檢(jian)測(ce)抗體(ti)裸抗，兼顧靈敏度(du)

D、增(zeng)加靈(ling)敏度(du)體系

a、加入曲通、吐溫等

b、加入特殊物(wu)質(zhi)，如(ru)S19

E、提高檢出(chu)率體系

a、多(duo)個抗(kang)體聯(lian)合使用，如CnTI項目(mu)

F、提(ti)高穩定性體系

a、緩沖液加入保護性蛋白、糖類、小分(fen)子化合物(wu)

G、等等其他體系 隨著研究深入，這個目錄會不斷(duan)增加(jia)，相應的方法也會不斷(duan)增多。

2、工藝流程 

工(gong)(gong)藝(yi)(yi)流程(cheng)，又(you)包(bao)含(han)生產工(gong)(gong)藝(yi)(yi)流程(cheng)和(he)試劑盒檢測(ce)操(cao)作工(gong)(gong)藝(yi)(yi)流程(cheng)兩個方面。

（1）生產(chan)工(gong)藝流程(cheng) 生產(chan)工(gong)藝流程(cheng)，對整個的產(chan)品性能(neng)，有非常大的影響，比如(ru)預包被(bei)板(ban)制備工(gong)藝，包被(bei)、封(feng)閉、干(gan)燥的溫(wen)度、時間，對整個性能(neng)影響很大，需要研發摸(mo)索。

（2）檢測操(cao)作工(gong)(gong)藝(yi)流程 相比生產(chan)工(gong)(gong)藝(yi)，試劑盒的檢測操(cao)作工(gong)(gong)藝(yi)，對性能影響(xiang)更(geng)大，一步法、兩步法，加樣(yang)量，加樣(yang)順序，溫(wen)(wen)育溫(wen)(wen)度，溫(wen)(wen)育時間。

三．思路

我們分(fen)析原料與工(gong)藝，就是為(wei)了(le)找到一個合適的研(yan)發(fa)(fa)思路(lu)，指(zhi)導研(yan)發(fa)(fa)過程，提高研(yan)發(fa)(fa)效(xiao)率，整個研(yan)發(fa)(fa)思路(lu)，我們再劃(hua)分(fen)為(wei)產品研(yan)發(fa)(fa)和改進研(yan)發(fa)(fa)兩個問題。

1、產品研發 

產品研發是一個(ge)(ge)從無到有(you)的(de)過(guo)(guo)程(cheng)，多數是根據市面上已(yi)有(you)的(de)試劑，研發自己公司沒有(you)的(de)產品。這(zhe)個(ge)(ge)過(guo)(guo)程(cheng)占研發的(de)大頭，我們(men)(men)(men)再將其細分為(wei)初步研發、預(yu)臨(lin)床(chuang)實驗(yan)和穩定性測試三個(ge)(ge)過(guo)(guo)程(cheng)。所有(you)的(de)研發，我們(men)(men)(men)都必須知道，一個(ge)(ge)性能項目，他(ta)是怎(zen)么評估的(de)，哪些因素會影響(xiang)這(zhe)個(ge)(ge)性能，如何改進，我們(men)(men)(men)以雙抗體夾心為(wei)例列舉(ju)。

（1）初步研發 初步研發時，一般重點強調三個活性成分：包被抗體、檢測抗體、校準品。包被抗體和檢測抗體，會有一個經驗濃度，校準品一般用合適基質，將抗原或者高值樣本進行梯度稀釋，獲取的梯度濃度進行第三方賦值，追溯到國際、國家或者企業標準品。

初步研發(fa)多數是在(zai)做配對(dui)篩(shai)選(xuan)，只需(xu)要用檢測(ce)限、線性范圍、可報告范圍這(zhe)三個性能評估項目，即可篩(shai)選(xuan)出候(hou)選(xuan)配對(dui)。比如拿到10株(zhu)抗體，可以(yi)做成100個配對(dui)，進行篩(shai)選(xuan)，選(xuan)出初步可用的候(hou)選(xuan)配對(dui)若干對(dui)。

對初篩(shai)的候選(xuan)配(pei)對，進行(xing)精(jing)密度、準確度（回(hui)收實(shi)(shi)驗(yan)(yan)）、干擾實(shi)(shi)驗(yan)(yan)評估(gu)，通過這些實(shi)(shi)驗(yan)(yan)，再二次篩(shai)選(xuan)候選(xuan)配(pei)對。

（2）預臨床實驗 不涉及臨床血清樣本的初步研發都完成后，獲得一定的候選配對，進行預臨床實驗，主要是評估準確度（方法學比較）和參考值區間。

（3）穩定性測試 通過上面兩個步驟，試劑盒初步成型，活性組分（包含預包被板、校準品、酶標抗體）的穩定性，需要一一評價與改進，直到滿足要求。

2、改進研發

整個試劑盒的研發，最終就是為了檢測臨床血清樣本，所有的分析性能評估項目，也是為這個目的而設計，但是在整個研發過程中，不管是預臨床試驗，還是正式臨床試驗，配對測試的臨床血清樣本量，是非常有限的，頂多就算是完成一個小試生產。到真正產品上市和臨床應用時，隨著樣本量的擴大，很多之前沒有暴露的問題，都會集中暴露，必須收集足夠數據，進行改進研發。

一(yi)般這(zhe)個階(jie)段，就是(shi)針(zhen)對(dui)臨(lin)(lin)床(chuang)不(bu)(bu)符合的樣(yang)本，特(te)別是(shi)假(jia)陽(yang)性(xing)、假(jia)陰性(xing)樣(yang)本，要(yao)對(dui)樣(yang)本進(jin)行不(bu)(bu)同廠家(jia)試(shi)劑檢測比對(dui)，成分分析等等，這(zhe)個過程(cheng)在(zai)預(yu)臨(lin)(lin)床(chuang)和(he)正式(shi)臨(lin)(lin)床(chuang)都會做，在(zai)預(yu)臨(lin)(lin)床(chuang)和(he)正式(shi)臨(lin)(lin)床(chuang)時，還要(yao)對(dui)檢測值(zhi)嚴(yan)重不(bu)(bu)符，但并未導致假(jia)陽(yang)、假(jia)陰性(xing)的樣(yang)本，進(jin)行分析。